
根据氨基酸的R基团的极性大小可将氨基酸分为四类:
① 非极性中性氨基酸(8种);
② 极性中性氨基酸(7种);
③ 酸性氨基酸(Glu和Asp);
④ 碱性氨基酸(Lys、Arg和His
谷氨酸为酸性(极性)氨基酸,丙氨酸为非极性氨基酸。于是在以极性有机溶剂(酒精)为展层剂的的流动相中,非极性的迁移快,而谷氨酸在乙醇的分配系数比丙氨酸大,迁移率慢。
纸层析法依据极性相似相溶原理,是以滤纸纤维的结合水为固定相,而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同,因而扩散速度不同,从而达到分离的目的。
试样经层析后可用比移值(Rf)表示各组成成分的位置(比移值=原点中心至色谱斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离之比),由于影响比移值的因素较多,因此一般采用在相同实验条件下对照物质对比以确定其异同。
RF值是在硅胶层析板上物质移动的距离和溶剂线的距离的比值。一般物质的RF值都是不同的,可以通过RF值判断是否是目标产物。
溶剂从原点渗透到距离a(一般在20—30厘米时测定)的时候,如果位于原点的物质从原点向前移动到b,那么b/a的值(0.0—1.0)就是这种物质的Rf值。
把葡萄糖和果糖在20℃下于正丁醇-醋酸-水(4∶1∶5)中展开,可分别得到0.18、0.23的Rf值,在醋酸乙酯-吡啶-水(2∶1∶1)中展开,则分别得到0.28、0.32的Rf值。
若滤纸、溶剂温度等保持恒定,则各种物质呈现特定的Rf值,成为鉴定物质的极重要的常数。
通过Rf与分配系数公式我们知道.Rf与分配系数、流动相与固定相的体积有关,由于体积比在同一实验条件下是常数,所以Rf只与分配系数有关.而分配系数取决于氨基酸的极性基团,而碳链的影响则对Rf影响甚微.
溶剂系统对氨基酸的影响两方面.氢键影响涉及两相暂不讨论.
一、极性方面,溶剂极性增加,物质的Rf变大.增加酸碱,也就是增大了溶剂的极性.从而提高物质的Rf.
二、PH值影响,氨基酸的解离度与PH 有关,解离度越大极性越强,极性强的物质在两相分配时,偏向极性的一项.氨基酸解离度越大,Rf越小.(PH值对中性氨基酸的影响不大)
你往溶剂系统中对于加入碱,对于酸性氨基酸来说,羧基会更多的解离,自然Rf降低(这个效果会很明显).而对于碱性氨基酸的盐溶液来说,解离度降低,Rf增大(这个 效果不会太明显,因为大部分都是以离子形式存在,解离度变化不大).
你往溶剂加酸,对于酸性氨基酸来说,羧基变化不大,氨基接受质子更多解离,Rf降低.对于碱性氨基酸,解离度增大,Rf也减小
PH值对Rf的影响其实质 是让你判断氨基酸的解离度(仅限酸碱氨基酸,PH对中性氨基酸影响不大)
当然以上判断不是绝对,需要根据再等电点左右,必须根据解离度变化来,而要计算解离度就需要各基团Pka值.只有 解离度增大Rf才一定变小,解离度变小Rf才会一定增大.
铺好薄层(硅胶)的玻璃板简称薄板,将含A B组分的试样溶液点在薄板的一端,然后放于封闭色谱槽中,用适当的展开剂(流动相)展开,当展开剂携带样品通过吸附剂时,A B两组分就在吸附剂和展开剂之间不断吸附、解吸附(溶解),再吸附、再解吸附。
极性大小不同,移动快慢不同。极性小上移快,展开剂极性越大,上移越快。用Rf表示。同种化合物在同样条件下,应具有相同的Rf值,可用于物质的鉴定。
硅胶的表面存在着硅醇基团(si-oh)和暴露的硅氧烷键(si-o-si)。硅醇基团是强吸附的极性基团。硅胶层析是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使物质分离, 一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附。
反相硅胶就是C8或者C18硅胶,极性很小,在柱子上面,基本上是极性大的先出来,极性越小越慢出来 正相柱相反,极性大的后出来,极性越小越容易冲出来。
RY温度保险丝也叫作一次性热熔断器,是一种不可复位的热敏保护器件。
是以检测温度的异常上升并切断电路为目的制造的,当周围温度升高到某不正常温度时,RY温度保险丝感受外界温度状态,将电路切断以避免火灾的发生。它的特点是:采用金属做外壳、以感温颗粒(有机化学物质)作感热体,对外界温度感应灵敏,动作温度准确,稳定,体积小,密封式结构,性能可靠。由于感温材料的构造是不通电的,故内部阻抗小,具有切断电流6A-15A(AC)的特长。
RY温度保险丝应用于咖啡壶、电熨斗、电饭煲、电吹风、变压器、电动机、空调、换气扇、电风扇、复印机、马达等,也可用于特殊场所,如:汽车、火车、船舶等制动装置、医疗设备等。
电饭锅RF表示,这是温度保险丝,在温度达到一个预定值的时候,RF内部断开,这个器件是一次性的,断开后,需要换新的。
pka的计算公式是-lgc(H⁺)。
化学pk值计算公式:Pk=-lgc(H⁺)。pK值即解离常数(pKa),是水溶液中具有一定解离度的溶质的的极性参数。解离常数给予分子的酸性或碱性以定量的量度,Ka增大,对于质子给予体来说,其酸性增加;Ka减小,对于质子接受体来说,其碱性增加。
荧光法在测定物质解离常数方面有一定的应用。此方法的依据是:具有荧光的物质溶液,在不同的浓度下会有不同的荧光强度。因此若改变溶液中的物质浓度,溶液的荧光强度也会相应改变,可以根据溶液荧光强度的变化所对应的物质浓度变化来得到物质的解离常数。
薄层色谱pH法是依据色谱体系pH值与离解性物质的Rf(分配系数的函数)值的关系建立起来的一种分析方法。其实质是:将等量待测物通过点样吸附到经不同pH值的缓冲溶液处理过的薄层色板上,然后在同一溶剂系统中展开,这样就能测得待测物质一系列的Rf值。用Rf值与对应的pH值作图。
可得到该物质pH—Rf特征曲线,依此特征曲线,可知其解离常数。薄层色谱pH法样品用量较少,实验设备简单,但是实验过程中要选择合适的溶剂系统,要严格控制薄层板的pH并且配置不同pH的缓冲溶液繁琐,因此未得到广泛应用。
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